בקשת עזרה

[ch561]

שתזכה לבנים זכרים

צדיק צדיק צדיק

 

[deathcaster]

תגיד את זה למורן המנהלת ../images/Emo3.gif

 

[קיפי סגול]

ספרים

שני ספרים שבהם יכולים להיות פרוטוקולים כאלה הם Ausbel et al. Current protocols in molecular biology ו - Sambrook et al. Molecular cloning: a laboratory manual. יש גם משהו של CDC, אבל אני לא זוכר את השם. השתמשתי בספרים האלו מזמן אבל אני מניח שיש מהדורות חדשות, ובכל מקרה אלו דברים קלאסיים שלא משתנים יותר מדי. אם זכרוני אינו מטעני: בעיקרון בופר פוספט מורכב מ- NaH2PO4 ו- Na2HPO4 אבל יש גם כאלה שמשתמשים ב K2HPO4 ו KH2PO4 , כאשר מדברים על ריכוז של 0.1M הכוונה היא שבתמיסה הסופית יש 0.1 מולר של כל אחד משני החומרים. ולא את ה PH לא מתאימים ע"י מיהול במים אלא ע"י טיטרציה (אם אני זוכר נכון ה PH של הבופר הוא חומצי וצריך בד"כ להעלות אותו ע"י הוספת בסיס NaOH או KOH לפי איך שהכנת את הבופר). שוב, קח את דברי בערבון מוגבל ובדוק בספרים (וגם חיפוש ברשת לא יכול להזיק)

 

[ch561]

תודה קיפי

כנראה זה באמת בופר של מלחי נתרן, לפי חיפוש ברשת. אתה אכן צודק וצריך לטטר NaOH במשך התגובה כדי לשמור על PH נכון. (לפי הפרוצדורה שבידי).

 

[d anny]

לגבי האנזים

ברגע שמוציאים אותו מ-80- הוא מתחיל לעבוד, אז בשום פנים ואופן לא להוציא את כל האנזים ליותר מהמינימום הנדרש (אלא אם אתה בטוח שיש לך מספיק אנזים רק לראקציה אחת). גם כשאתה מוציא אותו רצוי להשתמש במגש מקורר (לא יודע איך קוראים לזה). אחרת הוא פשוט יתקלקל לך. סביר מאוד שזמן האינקובציה הוא במהלך הניסוי, זה הזמן בו האנזים עושה את מה שהוא אמור לעשות (במבחנות דקות המעבר מ80- לטמפ' הרצויה הוא מהיר מאוד, קל וחומר שהאנזים נמהל בכמות גדולה של חומר חם), אנזימים בד"כ נשמרים בתמיסת אנטי-פריז ואין שום צורך לחמם אותם. אם לא מוקצב לך זמן לאינקובציה במהלך הניסוי, אבל כתוב בפרוטוקולים לאנזים שיש, אז כדאי מאוד לשאול את מי שכתב את פרוטוקול הניסוי או אחראי עליו. אם אין אחד כזה, סימן שזה אתה. תקרא את החומר התאורטי ותחליט. אם אתה יכול תבצע את שניהם (עם ובלי אינקובציה, כשהאינקובציה היא שלב בניסוי ולא משהו מקדים) ותקרא לאחד (זה שלא יוצא טוב) ביקורת. בהצלחה.

 

[ch561]

תודה על האינפורמציה החשובה

כמות האנזים שבידי תספיק למספר ניסויים מועט (בסביבות 10). לצערי אין לי מושג מה זה מגש קר (ואני בספק (רב) שיש לנו בחברה מגש כזה). אני אנסה להוציא מהאנזים בלי להוציא את הקופסא מהמקפיא. האנזים נרכש מסיגמה-אולדריג'. בקטלוג כתוב זמן אינקובציה. שבקשתי מהם לשלוח לי פרוצדורה הם שלחו לי ושם אין איזכור לזמן אינקובציה. אני מאמין שהיא מתרחשת במהלך התגובה (שהיא די ארוכה). תודה רבה!

 

[medichi]

10 ראקציות?..זה הכל?!

הגם אתה מתפרנס מדוגמיות?

מגש קר זה פשוט קופסא עם דפנות עבות מחומר מבודד ,בתוכה שמים אנזימים...הקופסא הזאת שומרת על הטמפרטורה הנמוכה שלה גם מחוץ למקפיא,סביר להניח שיש לכם משהו כזה אם אתם עובדים עם אנזימים או חומרים שרגישים לחום.

 

[ch561]

לא דוגמיות אלא קיט

הקיט נקנה בסיגמה-אולדריג' ועולה הרבה כסף. בתוך הקיט יש הרבה דוגמיות קטנות של 1-5 מ"ג של אנזימים מכל מיני מקורות. לגבי הקופסה, אין סיכוי שיש לנו אותה. זאת הפעם הראשונה שאנחנו עובדים עם אנזימים (אפילו אנחנו לא יודעים איך לסווג את רמת הסיכון שלהם, כימאים או לא?

). אם יש לך איזה מק"ט או קישור לאותה קופסה, אנחנו (ז"א החברה) נשמח לרכוש קופסאת פלא כזו

. אם כבר אז עוד שאלה לדרך: הPH האופטימלי הוא 7, אם אני זוכר נכון, יכול להיות ששינוי הPH לא יגרום לאנזים להיות לא פעיל אלא רק יגרום לו לעבוד פחות יעיל? (יעיל= מהירות ראקציה וסלקטיביות)