בקשת עזרה

[ch561]

בקשת עזרה

אני עומד לפני ניסוי עם אנזימים (בפעם הראשונה בחיי) וישנם כמה דברים שאני לא יודע/מבין. ז"א כתוב הכל במהלך הניסוי אבל ישנם כמה חורים של מידע (ובאמת חשוב לי שהתוצאות של הניסוי, לטובה או לשלילה, לא יהיו בגלל טעות שלי. במקרה של טובה זה פחות חשוב

). שאלה ראשונה: במהלך הניסוי כתוב להשתמש בתמיסת בופר של PHOSPHATE. כתוב לי להשתמש בבופר PHOSPHATE של PH7 בריכוז של 0.1 מולר וזהו! עכשו לאיזה בופר הם מתכוונים? ניתן להגיע לPH7 בבכמה דרכים, לפי חיפוש ברשת (סוגי מלח וחומצות שונים). יש לנו במעבדה תמיסת בופר פוספט מוכנה, אבל ללא איזכור של מולריות! (זאת תמיסת בופר של המחלקה האנליטית(כימיה)) האם ניתן להשתמש בזה? שאלה שניה: בקטלוג שהזמנתי ממנו את האנזים כתוב, זמן התקובציה של 60 דקות. אבל במהלך הניסוי אין איזכור של זמן אינקובציה. מה אני אמור לעשות? האם צריך לעשות אינקובציה לפני תחילת הניסוי עצמאית? האנזים מוחזק ב 80- מעלות. זהו לבינתיים, בטוח יהיו עוד...... תודה מראש

 

[deathcaster]

תגובה

אם יש במעבדה בופר מוכן, למה לא לקחת פשוט pHmeter ולמדוד את הpH שלו ? ואם זה לא מתאים, למהול עד שמגיעים לרמת החומציות הדרושה.... לגבי השאלה השנייה, לא בטוח , לכו אני לא רוצה להטעות

 

[ch561]

הבעיה שלי היא, האנזים

הוא יקר לליבי (ולכיסי) ויש לי ממנו מיליגרמים בודדים. אני רוצה להיות בטוח שאלו תנאי הניסוי, חשבתי שאני אומר בופר פוספט, כל ביולוג ישלוף לי את הרכבו. משהו בסיגנון סיליקה לקולונה וכל כימאי ידע איזה MESH זה.

 

[ch561]

ושכחתי, תודה בכל מקרה

 

[ofsher]

חומציות לא משתנה במיהול

כשמוהלים הריכוז יורד אבל ה - PH נשאר אותו הדבר

 

[deathcaster]

המממממממ

אמנם סיימתי מזמן קורס כימיה פיזיקלית אני עדייו זוכר שם שפונקציית ה-pH מתייחס למינוס הלוג של ריכוז יוני המימן בתמיסה.... אם מוהלים תמיסה עם יוני מימן, ריכוזם יורד, וכך בהתאם יעלה ה-pH , לכן שתקח חומצת מלח עם pH 2.0 ותשפוך על העור שלך, כנראה שיקרה לך נזק, אבל אם תמהל אותה פי 10000 , הpH שלה יהיה 6, ואם תשפוך את זה על היד, לא יקרה לך כלום..... אבל יכול להיות שאני טועה......... מצד שני מותר לי לטעות, אני עוד לא עושה מאסטר. כמובן שבמקרה של בופר, ותמיסות ניטראליות החומציות לא משתנה, אך זה לא מה שאתה כתבת.

 

[ofsher]

בופרים

התייחסתי למה שפותח השרשור כתב - תפעיל שיקול דעת...

 

[ofsher]

ודרך אגב..

אתה גם התייחסת למה שהוא כתב ואמרת לו למהול את הבופר... שזה טעות

 

[deathcaster]

תגובה

צודק, התכוונתי לטטר ולא למהול... שים לב שאני לא היחיד שכתב תגובה זו.

 

[arianna]

מה דעתך?

אתה בטוח שהכוונה היא לא לבופר שנקרא בפי העם PBS (Phosphate buffer saline)? בבופר זה משתמשים על מנת לשטוף ממברנות אחרי western למשל... זה בופר שאכן צריך לייצב אותו על ph נייטרלי ועושים את זה עם מודד ph ואז מטטרים עם חומצה אן עם בסיס עד להגעה לph רצוי. אגב, הבופר הזה לא מורכב רק מפוספט אלא מהמון מרכיבים (nacl,koh,k2ho4,mg) ועוד...הוא סתם נקרא כך בופר פוספט. נראה לי שהכוונה היא באמת לבופר זה כי כמו שאמרתי זה בופר נפוץ בעבודה עם חלבונים. אם תרצה את הפרוטוקול שלו תקיש פשוט בגוגל phosphate buffer saline וזה ייתן לך את הכמויות המדוייקות! אגב, למה בדיוק אתה צריך את בופר הזה?

 

[ofsher]

אם כתוב בופר פוספט אז זה לא PBS

תסתכל כאן www.cf.ac.uk/phrmy/PCB/LabProtocolsPDFs/Cellculture/PBS.pdf בופר פוספט מכינים מחומצה זרחתית והמלח שלה ב - PBS מוסיפים מלחים נוספים כמו נתרן כלוריד

 

[ofsher]

הבופר נועד לשמור על ה -PH

ה PH הדרוש לפעילות תקינה של אנזימים הוא 7-7.5 ולכן דרוש בופר שישמור על החומציות

 

[deathcaster]

הוא נקרא בופר פוספט כי

המרכיב העיקרי שבו הוא מלח פוספט

, הוא לא נקרא סתם בופר פוספט

 

[arianna]

לא צריך להתנשא...

ברור שלא התכוונתי שהוא נקרא "בופר פוספאט" כי זה שם נחמד ויפה...התכוונתי ש- PBS (בופר שמשתמשים בו הרבה במאסטר

)מכיל הרבה מרכיבים אבל עדיין קוראים לו סתם "פוספאט בופר סליין" לפי מרכיב בודד ולפעמים זה יכול להטעות כאילו יש רק מרכיב אחד בו...

 

[deathcaster]

חלילה !!!!

לא התכוונתי להתנשא כלל וכלל. אני מסכים עם כל מה שכתבת. אגב יש אתר ל-DIFCO , אפשר להסתכל שם גם על אלפי סוגי הבופרים שישנם....אם אינני טועה .

 

[arianna]

../images/Emo140.gif

 

[ch561]

תודה אריאנה../images/Emo140.gif

רק שתדעי שאת לא היחידה שאמרה לי להשתמש ב PBS.

 

[ofsher]

אולי תכתוב את שם האנזים?

 

[ch561]

אסטרזות

 

[deathcaster]

לגבי הבופר

בבקשה - תחשב בעצמך