ניקוי חלבונים

[pc girl]

ניקוי חלבונים

היי חברים,
אני עובדת על כמה שאלות בניקוי חלבונים ונתקעתי. גם לא מצאתי מספיק חומר באינטרנט ואני פשוט אבודה. אשמח לעזרה בעניין-

-ראשית, לא מבינה מה זה normdised absorbance בציר הY. מה זה הערך הזה? מה הוא בדיוק מודד? הפכתי את גוגל, לא קיים ערך כזה, קיים משהו אחר שגם ממנו לא הבנתי יותר מידי (משהו על יחס הפוך של לוגריתם, שקר כלשהו). זה אותו דבר?

-Dextran- לאיזו שיטה להפרדת חלבונים הם מתכוונים?

-איך אני יודעת עפי מה הם מפרידים את החלבונים? ממה שקראתי, catalse זה אנזים (קטליזטור), סדר גודל של 500 חומצות אמינו (55kda), אלבומין 65-70kda, ולכן אני יכולה לנסות לנחש שהפרידו אותם באלקטרופורוזה (?) כיוון שהקטלז יצא קודם (הקל יותר) ואלבומין (הכבד) יצא אחריו. ואת הphenol red ע"י אלקטרופורוזה דו מימדית... כי זה פשוט משתמש בPh?
אני די מנחשת, כי לא יצא לי להיות בתרגול כשדיברו על זה, ואין שום התאמה בין המצגות לבין השאלה הזאת. (ואחרי שהפכתי את גוגל מכל הכיוונים, לא מצאתי שום דבר בסגנון)
אשמח לעזרה, אני יושבת על זה כבר כמה שעות בניסיון להבין מה הם רוצים.
תודה

 

[pc girl]

השאלה הראשונה והשניה לא רלוונטיות

אשמח רק לדעת האם אני בכיוון בשאלה השלישית
תודה

 

[Colonel Ardenti]

תשובה

מדובר בהפרדה בכרומטוגרפית size exclusion (נקראת גם gel filtration) שמפרידה לפי גודל. הפיק הראשון הוא קטלאז שגודלו כ-200,000 קילו דלטון (טטראמר, כל תת יחידה 50 אלף). הפיק השני הוא אלבומין כ-70 קילו דלטון, הפנול רד היא מולקקולה קטנה בהרבה. זוהי הפרדה אופיינית לקולונה מסוג זה שבה המולקולות הגדולות יוצאות ראשונות.
ציר Y מתייחס לבליעה ב-UV- כלומר הפיקים מזוהים ע"י בליעה באורך גל מסוים. לא ברור לי יחסית למה מנרמלים.

 

[pc girl]

תודה רבה!