מה ההבדל בין cDNA ל-DNA ?

[T b a g]

מה ההבדל בין cDNA ל-DNA ?

אני אחדד את השאלה. 1.אם אני מפיק RNA ומבצע ריאקציית RT-PCR מתקבלת הגברה של cDNA 2.אם אני מפיק DNA ומבצע PCR מתקבלת הגברה של DNA (?) האם במבנה התוצר הסופי יש הבדלים בין שתי הפעולות,והאם אני יכול לבצע אותן מניפולציות על שתי התוצרים ? (למשל שיבוט) תודה לעונים.

 

[מעיןבר]

יש הבדל במקור

ומכאן שב"תוכן" של ה- DNA. לגבי השימושים - זה מאוד תלוי, כי כשאתה עושה cDNA אין לך את הפרומוטר של הגן ואת האינטרונים שלו שעשויים להיות משמעותיים ביותר בהמשך העבודה (לא פעם בשיבוט מכניסים דווקא את הפרומוטר ובודקים את פעילותו).

 

[T b a g]

לגבי המקור זה די ברור אבל

התוצר הוא cDNA או DNA השאלה אם הם שונים או זהים במבנה הכימי שלהם (מתילציות וכד') לגבי השיבוט אני מעוניין דווקא ברצף עצמו ללא אינטרונים או פרומוטור, (אני מוסיף פרומוטור אחר) כלומר, האם אני יכול לקחת רצף cDNA ולשבט אותו ? או שאני חייב להוציא את הרצף מ-DNA ? תודה.

 

[מעיןבר]

לגבי המבנה

למיטב ידיעתי DNA גנומי הוא חד גדילים - cDNA דו גדילי. ברור שיש הבדל במתילציות, כי cDNA הוא תוצר סינטתי ומתילציות תלויות בנוכחות האנזימים שיעשו את זה. תיאורטית אין מניעה לשבט cDNA, השאלה היא מה יקרה לו בתהליך השעתוק בתא. למיטב ידיעתי מקובל דווקא לשבט גנים ממקור של DNA אבל אני לא עוסקת בנושא והידע שלי תיאורטי בעיקרו.

 

[T b a g]

תודה

 

[מעיןבר]

אופססס - טעות קריטית

DNA גנומי הוא דו-גדילי.

 

[feder100]

תקשיב!

אם אתה רוצה לשבט גן, תפיק RNA, תעשה RT אח"כ תזמין פריימרים מתאימים ותדחוף אותו לפלסמיד ביטוי (pcDNA3.1). אח"כ תעשה טרנספקציה לתאים! אם אתה צריך הנחייה תפנה אלי. עכשיו סיימתי פרוייקט כזה מתחילתו עד סופו. ועדיף cDNA על DNA גנומי!!! לא תצליח לשבט בעזרת DNA גנומי גם אם תעמוד על הראש...

 

[T b a g]

תודה,שלחתי מסר בפרטי