היי אשמח קצת לחומר רקע על השיטה, מה היא עושה וכיצד היא עושה זאת , ומה ההבדל בינה לבין בדיקת חלבון ישירה ע"י בליעה בספקטרופוטומטר באורך גל 280nm
אודה לכם אם תוכלו להפנות אותי לאתרים מתאימים לקריאה בנושא
היי!
בדיקת חלבון בספקטרופוטומטר באורך גל של 280 ננומטר בודקת בליעה של טבעות ארומטיות. בחלבונים טבעיים בדרך כלל יש חומצות אמיניות שיש בהן טבעות ארומטיות (כמו פנילאלנין, טריפטופן וטירוזין אם אני זוכר נכון). הטבעות הארומטיות האלה יכולות לבלוע אור באורך גל של 280 ננומטר. ככל שבחלבון יהיו יותר חומצות אמיניות ארומטיות כך הבליעה שלו באורך הגל נ"ל תהיה גדולה יותר. ואם בחלבון יש כבר טבעות ארומטיות אז ככל שריכוז החלבון יגדל כן תגדל גם בליעתו ב280 ננומטר.
שיטת ברדפורד לעומת זאת היא שיטה לצביעה כימית של חלבון על מנת לבדוק את בליעתו. בדרך כלל כאשר רוצים לצבוע חלבונים ולבדוק את בליעתם בתחום האור הנראה צובעים אותם כימית. בבדיקת ברדפורד צובעים את תמיסת החלבון בחומר שנקרא קומאסי - http://he.wikipedia.org/wiki/שיטת_ברדפורד - שיטת ברדפורד http://he.wikipedia.org/wiki/קומאסי - על חומר הצבע קומאסי.
הקומאסי נקשר באופו כימי (ע"י משיכה חשמלית) לשיירים הטעונים חיובית של חומצות אמיניות בסיסיות וכך בעצם נוצר הקישור. לאחר מכן ניתן לבדוק בליעה בספקטרופוטומטר עבור אורך גל מסוים, להכין עקום כיול וכך למצוא ריכוזי חלבון שונים בהתאם לבליעתם באותו אורך גל שנקבע לפני כן.
